Определение оптимального времени проведения вязки.

       Методика цитологического исследования.

Для определения благоприятных дней вязки с помощью влагалищных мазков необходимо иметь: 
1. Микроскоп с увеличением от 80 до 300 ( можно больше ). Чтобы узнать увеличение микроскопа нужно умножить увеличение окуляра ( например 10 ) на увеличение объектива ( например 8 ). Получим 10х8=80.
2. Предметные стеклышки ( на которые будем наносить мазок ).
3. Покровные стеклышки ( которыми будем прикрывать предметные ). Если не найдете покровных, можно будет прикрывать мазок сверху вторым предметным стеклом.
4. Вода без примесей ( дистиллированная или купить в аптеке воду в ампулах ).
5. Палочки для чистки ушей ( человеческие ).
6. Краситель ( я использовала метиленовый синий, продается в зоомагазинах для аквариумов, а можно пользоваться штемпельной краской - продается в канцелярских товарах, эффект одинаковый ). Некоторые покупают в аптеке фукорцин для прокрашивания, тогда мазки будут не синеватого, а красноватого цвета.
7. Пипетка для красителя.

Можно брать мазок, когда сука лежит ( кому как удобнее ). Когда берете мазок, желательно брать его с верхнего свода влагалища, тщательно вытирая его ватной палочкой.

82819108

Техника выполнения: 
1. Взять чистое предметное стеклышко, хорошо вымытое и протертое досуха, положить его на чистую салфетку. 
2. Взять ватную палочку, окунуть ее в дистиллированную воду, встряхнуть палочку в руке несколько раз, чтобы убрать лишнюю воду.
3. Влажной палочкой взять мазок у суки, засунув ее поглубже в петлю ( сантиметра на 2-3 ), как бы вытирая петлю изнутри, не дотрагиваясь при этом руками ( с верхнего свода ). 
4. Этой палочкой прокатить по предметному стеклу ( при этом не сильно нажимая, чтобы слой мазка не был толстым ). Визуально вы увидите на стекле мутную полоску - это и есть ваш мазок, который необходимо прокрасить. 
5. На мазок нанести одну каплю красителя пипеткой, осторожно накрыть покровным стеклом, чтобы не было пузырьков воздуха.

 И МОЖНО СМОТРЕТЬ В МИКОСКОП... 

Какие клетки мы можем там увидеть:
1. Парабазальные ( округлые с крупным ядром, небольшие по размеру ).

12781374

2. Промежуточные ( округлые, с более прозрачной цитоплазмой, ядро уменьшается, клетка увеличивается за счет плазмы, крупнее парабазальных ).

98508679

3. Поверхностные клетки ( эстральные чешуйки ) - это именно то, что нас интересует. Во время плодных дней практически все клетки должны быть именно такими, промежуточные клетки могут присутствовать в единичном количестве.

66104025

Эстральные чешуйки выстраиваются в цепочки ( склеивание ), но у некоторых сук склеивания не происходит, но оплодотворение наступает. Клетки как бы перекрывают друг друга ( подобно черепице ), расположены перпендикулярно друг к другу, контуры одной клётки легко просматриваются сквозь прозрачную цитоплазму другой.

24091420

При увеличении 80-120 смотрим общий фон, при увеличении 300 и выше - рассматриваем клетки. В период покоя мы увидим единичные клетки на фоне лейкоцитов ( лейкоциты более мелкие, как брызги или песок, разбросанный по полю мазка ). 

Примеры мазков: 
День 1. В данном случае это первый день взятия мазка, а не начала течки, он совпал с окончанием проэструса. Обычно мазки начинают брать с 6-7 дня течки. Проэструс ( промежуточные клетки и большое количество эритроцитов и лейкоцитов, поверхностные клетки - единичные ). Эритроциты и лейкоциты мелкие, в виде песка. На мазке лейкоциты самые мелкие, темно синего цвета. Фон мазка полупрозрачный ( мутный ).

67376198

День 2. Начало эструса ( поверхностных клеток много, но промежуточные еще тоже в большом количестве, лейкоцитов стало заметно меньше, фон мазка очищается, становится голубым и более чистым, прозрачным ).

98533778

День 3. Эструс, начало плодных дней. Зачатие вероятно. Почти все клетки поверхностные - многоугольные, безъядерные. Промежуточные клетки и лейкоциты в небольшом количестве, фон мазка чистый, светло-голубой.

98618143

День 6. Эструс, плодные дни ( почти все клетки поверхностные, лейкоциты практически исчезли, фон мазка чистый, светло-голубой, как небо ). Время, идеальное для зачатия.

32089947

День 9. Эструс, окончание плодных дней ( почти все клетки поверхностные - многоугольные, безъядерные ). Небольшое количество промежуточных клеток округлых, с небольшим ядром. Появляются лейкоциты в небольшом количестве, фон мазка прозрачный, светло-голубой.

99624198

День 10. Эструс, окончание плодных дней ( почти все клетки поверхностные - многоугольные, безъядерные ). Ороговение усиливается. Количество лейкоцитов увеличивается, появляются промежуточные клетки. Фон мазка становится не таким прозрачным, как был.

17430924

День 11. Диэструс. Зачатие невозможно ( почти все клетки промежуточные и базальные, большое количество лейкоцитов ). Фон мазка становится грязным и мутным.

18314740

День 12. Диэструс, 2-й день. Зачатие невозможно ( все клетки промежуточные и базальные, большое количество лейкоцитов ). Фон мазка грязный и мутный.

86103685

Примеры цитологических мазков с объяснениями:

68725440

Эструс, плодные дни, все клетки поверхностные - многоугольные, фон мазка светлый, прозрачный. Клетки как бы перекрывают одна другую. День, благоприятный для зачатия.

54831271

Диэструс, зачатие невозможно. Клетки парабазальные ( с большим ядром круглые и промежуточные ( с маленьким ядром )). Поверхностные клетки отсутствуют, либо присутствуют в единичном числе. Большое число лейкоцитов, фон мутно-грязный. Период фертильности прошел. 

Одними из признаков дней, благоприятных для вязки являются:
- Изолированное расположение клеток на расстоянии друг от друга,или в виде черепицы, когда контуры одной клётки легко просматриваются сквозь прозрачную цитоплазму другой. 
- Светлый прозрачный фон мазка при отсутствий лейкоцитов 
- Клетки располагаются группами по 4-6 клеток или скоплениями. 

Признаками окончания плодных дней являются:
- Постепенно начинает уменьшаться число поверхностных клеток и увеличивается число промежуточных клеток.
- Из-за изменения характера слизи и появления лейкоцитов мазок приобретает мутный, темноватый фон.
- Последующее уменьшение числа поверхностных клеток и увеличением числа промежуточных.

Ниже приведена информация по материалам книги “ Английский бульдог ” Бейли С. Хейнс из серии: " Библиотека Американского клуба собаководства ". 

... Наберитесь терпения и не торопитесь с вязкой. Лучше это сделать позже, чем раньше. Цель состоит в том, чтобы вязка произошла перед самым “ выходом ” суки из цикла ( до того, как в мазке вновь появятся круглые клетки с большими ядрами и лейкоциты ). Если вы пропустили оптимальное для вязки время, возможно, будет не поздно вязать суку сразу же по наступлении выхода из цикла, хотя сука может и не принять кобеля при этом. 

Пока сука не выйдет из цикла, вы не можете быть уверены, что провели вязку вовремя.

Если в период проэструса или вообще в течение цикла в мазке присутствует необычно большое количество лейкоцитов, у суки, вероятно имеется какая-то инфекция, хотя при этом при оптимальном для вязки периоде, мазок может выглядеть совершенно нормальным.

В то же время при наличии у суки инфекции нейтрофилы, промежуточные или парабазальные клетки часто могут появляться в неподобающие для себя сроки. “ Группировка ” безъядерных клеток не наблюдается, исследование вагинальных мазков становится малоэффективным. 

Еще один метод состоит в том, чтобы вязать суку сразу после того, как анализ мазка засвидетельствует ее выход из цикла. 

Следует обратить внимание на мазок инфицированной суки: некоторые клетки, хоть и безъядерные, но необычайно округлые. Кроме того бросается в глаза обилие лейкоцитов.

Имеется несколько типов лейкоцитов, но именно нейтрофилы чаще всего присутствуют в вагинальном мазке.

Следы лейкоцитов могут наблюдаться в период проэструса. Они появляются к концу течки - “ на выходе ”. Однако в период, наиболее оптимальный для вязки, лейкоцитов в мазке нет.

Эритроциты ( красные кровяные клетки ) могут присутствовать или отсутствовать на протяжении всего цикла и практически не влияют на результаты анализа мазка. Они очень малы по сравнению с лейкоцитами и при использовании метиленового синего практически не видны. ... 

Примерно третий день течки ( проэструс ): Грязный фон из клеточных остатков и рваные края клеток. По мере приближения течки к дню, оптимальному для вязки, этот грязный фон очистится, а края клеток станут резкими и четко очерченными. 

Следующий этап ( начало эструса ): группировка клеток продолжается, фон очистился, клетки постепенно становятся безъядерными ( но ядерные клетки еще присутствуют ), некоторые из них выглядят как взаимно перпендикулярные штрихи. 

На следующем этапе ( эструс ) появляется большая скученность клеток, они практически все безъядерные. Вот с этого дня нужно вязать.

Окрашивание по Харриса-Шора, фото взяты из книги " Практическое руководство по разведению собак " ( Royal Canin ). 

Эструс ( общая картинка ).

62831146

Эструс ( картинка при увеличении ).

58173319

Диэструс ( общая картинка ).

10491210

Диэструс ( картинка при увеличении ).

03003268

       Другие способы, помогающие определить готовность суки к вязке. 

1. Старинный способ определения сроков овуляции от ветеринаров в полевых условиях. Берем чистое стекло и прикладываем его к петле, чтоб там отпечаталась слизь. Немного размазываем слизь по стеклу и ждем пока высохнет. если кристаллизуется, пора бежать к коблу. Если засыхает как просто грязное пятно как "от молока" например, то или еще рано или уже поздно. 

 2. Можно использовать тест-полоски " Уриглюк-1 " ( или любые другие ) для определения уровня глюкозы в моче - для диабетиков ( продаются в человеческой аптеке ). На самой баночке есть цветная шкала - можно приложить к ней свою полоску и точно определить степень " зеленения "... или коричневения... Когда микроскоп показывает самое благоприятное время для вязки, окрас тест полоски идет уже на убыль. При супер зеленой полоске, по тесту мазка в микроскопе, еще как бы чуточку рановато. Т. е. тест показывает созревание яйцеклетки и, в принципе, полную готовность к вязке, но есть еще пара дней до ее выхода, а мазок именно тот самый пик выхода.

" Уриглюк " представляет собой маленький тубус с плотной крышкой, там - полосочки непромокаемой бумаги с маленьким индикатором на одном из кончиков полоски. На самом тубусе - цветовая шкала, по которой проводится сравнение. Погрузить полоску индикатором прямо «туда» на глубину 2-3 см.. Дело в том, что по инструкции это дело используется для определения сахара в моче. И рекомендуют погружать в мочу на 5-6 сек.. Т. е. предполагается, что для достоверности результата, материал индикатора должен всё же пропитаться испытуемой жидкостью. А поскольку наша жидкость гуще мочи, то надо ждать уж никак не меньше этих секунд, а то и больше ( 7-8, например ). И желательно обеспечить максимальное соприкосновение индикатора и материала, что достигается именно погружением «туда». Или же, если достаточно выделений на поверхности петли, то положить полосочку индикатором прямо в них, завалив собаку на спину. Результат смотрим в течение 2-х минут. 

3. Можно использовать микроскоп Арбор или обычный микроскоп для исследования кристаллизации слюны. В период, благоприятный для вязки вид слюны под микроскопом будет представлять собой листья папоротника. Слюна у собаки берется на голодный желудок.

4. Обычно течка длится 17-24 дня ( в среднем 21 день ). В начальной стадии ( 1-10 день ) кровянистые выделения не прозрачны, ярко-красного цвета, капля, упавшая на пол, имеет ровные края, высыхает быстро. Промежность сильно набухшая, петля имеет вид резинового кольца, на ощупь сильно отекшая. В стадии овуляции - способности к оплодотворению ( 8-13 день ) - выделения светлеют ( цвет сока талого мяса ), приобретают резкий запах ( не свежей рыбы ), капля, упавшая на пол, имеет вид солнышка ( края имеют лучики ). В этот период сука проявляет активный интерес к меткам мочи, оставленными кобелями и скулит при встрече с ними, охотно отводит в сторону хвост и подергивает вверх петлю при поглаживании спины. Петля на ощупь смягчается, пропадает отечность, кожа петли имеет вид печеного яблока, внешне петля напоминает поперечно-расположенную лодку. Если взять выделения и потереть пальцы между собой, вы убедитесь, что они имеют слизистую консистенцию. При совпадении вышеперечисленных признаков собаку можно считать готовой к спариванию, которое проводят два раза ( первая вязка и через день вторая, контрольная, вязка ). 

5. В стадии овуляции яйцеклетки выходят недозревшими, но готовыми к оплодотворению, как правило, 48 часов спустя. В идеале вязку или искусственное осеменение следует осуществлять в течение 48 часов с момента овуляции, что позволяет большинству способных к оплодотворению яйцеклеток и сперматозоидов достичь места " встречи " ( маточные трубы ). Яйцеклетки с момента их созревания способны к оплодотворению в течение 2 суток ( у некоторых пород эта способность, похоже, может сохраняться свыше 4 суток ). Просветление истечений из петли, как правило, означает конец проэструса, но не может служить достоверным контролем овуляции ( у некоторых сук, таких, как чау-чау, кровянистые выделения возможны до конца эструса ).

Овуляция происходит чаще всего на 1-3 день от начала охоты ( иногда на 5-7 день или даже за 2 дня до нее ). Обычно созревшие фолликулы овулируют в течение суток. Однако яйцеклетки становятся способными к оплодотворению только через 2-3 дня. Общий срок жизни яйцеклетки после выхода из яичника - 5-8 дней. 

Показатели для осеменения живой спермой ( ветеринары системы Каниколд ): 
< 1 ng/ml делаем повторный анализ через 4 дня; 
3-4 ng/ml повторяем анализ через 1-2 дня ;
5-7 ng/ml ( 15-25 nmol ) овуляции произошла, осеменяем на второй день и в следующие три дня; 
8-11 ng/ml ( 25-35 nmol ) осеменяем сегодня и через день; 
11-19 ng/ml ( 35-60 nmol ) осеменяем сегодня и в течение 24 часов; 
> 19 ng/ml ( >60 nmol ) осеменяем сегодня ( сейчас ! ). 

Для живой спермы:
Фертильный период для спаривания 4-10 til 20 ng/ml. 

Осеменение замороженной и охлажденной спермой:
5 NG/ML ( 15 nmol/l ) инсеминация от 2,5 до 3 дней спустя; 
9-12 ng/ml ( 29 - 38 nmol/l ) инсеминация на следующий день;
15 ng/ml ( >52 nmol/l ) инсеминация сегодня. 

Всем успехов и здоровых малышей !

При подготовке статьи использованы материалы с сайтов:
1. www/arbl.cvmbs.colostate.edu/hbooks/pathphys/reprod/vc/index.html 
2. http://bulldogs-klan.clan.su/forum/5-54-1

Источник: http://www.labrador-retriver.ru/